Page 181 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

pengambilan DNA oleh sel ragi, dan sering digunakan dalam transformasi Saccharomyces cerevisiae. Namun, untuk sebagian besar organisme yang lebih tinggi, diperlukan metode yang lebih canggih.
Sebagian besar organisme, penghalang utama untuk pengambilan DNA adalah dinding sel. Sel hewan yang dikultur, yang biasanya tidak memiliki dinding sel, mudah diubah, terutama jika DNA diendapkan ke permukaan sel dengan kalsium fosfat atau dalam liposom yang menyatu dengan membran sel. Untuk jenis sel lainnya jawabannya sering kali adalah dengan menghilangkan dinding selnya. Enzim yang mendegradasi ragi, jamur, dan dinding sel tumbuhan tersedia, dan di bawah kondisi yang tepat protoplas utuh dapat diperoleh. Protoplas umumnya mengambil DNA cukup mudah, tetapi transformasi dapat dirangsang dengan teknik khusus seperti elektroporasi, di mana sel-sel dikenakan pulsa listrik pendek, dianggap menginduksi pembentukan sementara pori-pori di membran sel, sehingga molekul DNA dapat masuk ke dalam sel. Setelah transformasi protoplas dicuci untuk menghilangkan enzim degradatif dan dinding sel secara spontan terbentuk kembali.
Berbeda dengan sistem transformasi yang dijelaskan sejauh ini, ada dua metode fisik untuk memasukkan DNA ke dalam sel eukaryot. Yang pertama adalah injeksi mikro, yang menggunakan pipet yang sangat halus untuk menyuntikkan molekul DNA langsung ke dalam inti sel yang akan diubah. Teknik ini awalnya diterapkan pada sel hewan tetapi kemudian berhasil dengan sel tumbuhan. Metode kedua melibatkan pemboman sel dengan mikroproyektil kecepatan tinggi, biasanya partikel emas atau tungsten yang telah dilapisi dengan DNA. Proyektil mikro ini ditembakkan ke sel dari senjata partikel. Teknik yang tidak biasa ini disebut biolistik dan telah digunakan dengan sejumlah jenis sel yang berbeda.
Transformasi dengan hewan dan tumbuhan, produk akhir yang diinginkan mungkin bukan sel yang ditransformasi, tetapi organisme yang ditransformasi. Tanaman relatif mudah untuk diregenerasi dari sel yang dikultur, oleh karena itu, satu sel tanaman yang ditransformasi dapat menghasilkan tanaman yang ditransformasi yang membawa DNA kloning di setiap sel, dan meneruskan DNA kloning ke
174