Page 71 - Modul Pembelajaran Elektronik Materi Inovasi Teknologi Biologi

Proses penggunaan plasmid dalam rekayasa genetika yaitu melalui

langkah-langkah berikut.

1) Peneliti menentukan jenis plasmid yang akan digunakan. Misalnya,

plasmid pBr 32 yang bisa digunakan untuk sel prokariotik dan plasmid Ti

yang bisa digunakan untuk sel eukariotik.

2) Penentuan tempat pengenalan enzim restriksi (pemotongan) yang akan

digunakan sebagai tempat penyisipan DNA asing, dan marker untuk

menandai masuk tidaknya plasmid ke dalam sel inang.

3) Penyiapan enzim restriksi sebagai tempat pemotong plasmid. Enzim

yang digunakan untuk memotong plasmid harus sama dengan pemotong

DNA asing, sehingga nanti keduanya bisa bersatu (saling komplemen).

4) Pemotongan plasmid dengan enzim restriksi pada daerah potongannya.

5) Plasmid disambungkan dengan DNA asing yang memiliki sifat tertentu.

b. Enzim restriksi

Enzim restriksi atau endonuklease restriksi adalah enzim yang
digunakan untuk memotong DNA secara spesifik. Enzim ini disebut juga

sebagai gunting biologi. Prinsip kerja enzim restriksi adalah sebagai berikut.

1) Enzim restriksi mengenali DNA pada situs khusus dan memotong di situs

tersebut.

2) Situs pengenalan restriksi adalah daerah simetri dengan palindrom.

Palindrom pada DNA artinya simetri yang membentuk untai DNA

berlawanan dengan sekuens basa terbaliknya.

3) Pemotongan enzim restriksi akan menghasilkan potongan berupa ujung

kohesif (sticky end) dan ujung rata (blunt end).

c. Enzim Ligase

Enzim ligase adalah enzim yang berfungsi untuk menyambung dua

ujung potongan DNA. Prinsip kerja enzim ligase yaitu sebagai berikut.

45