Page 215 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT
P. 215
2) Analisis protein dengan mutagenesis in vitro
Meskipun HRT dan HART dapat mengidentifikasi produk translasi dari gen kloning, teknik ini hanya memberi tahu kita sedikit tentang protein itu sendiri. Beberapa pertanyaan utama adalah pada hubungan antara struktur protein dan cara aktivitasnya. Cara terbaik untuk mengatasi masalah ini adalah dengan menginduksi mutasi pada gen yang mengkode protein dan kemudian menentukan pengaruh perubahan urutan asam amino terhadap sifat produk translasi (Gambar dibawah 136). Dalam keadaan normal, mutasi terjadi secara acak dan sejumlah besar mungkin harus disaring sebelum ditemukan yang memberikan informasi berguna. Sebuah solusi untuk masalah ini disediakan oleh mutagenesis in vitro, sebuah teknik yang memungkinkan mutasi terarah dibuat pada titik tertentu dalam gen kloning.
Gambar 136 Mutasi dapat mengubah urutan asam amino protein. Produk translasi dapat mempengaruhi sifat-sifatnya. (Sumber: Brown, 2010)
Meskipun berpotensi berguna, manipulasi ini bergantung pada kejadian kebetulan dari sisi restriksi di area yang diminati dalam gen kloning. Mutagenesis terarah oligonukleotida adalah teknik yang lebih serbaguna yang dapat membuat mutasi pada titik mana pun dalam gen.
208
