Page 213 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

Gambar 133 Sistem Translasi tanpa Sel (Sumber: Brown, 2010)
Baik HRT dan HART bekerja paling baik ketika gen yang dipelajari telah diperoleh sebagai klon cDNA. Untuk HRT, cDNA didenaturasi, diimobilisasi pada nitroselulosa atau nilon, dan diinkubasi dengan sampel mRNA (Gambar 134). Pasangan mRNA spesifik dari cDNA berhibridisasi dan tetap melekat pada membrane. Setelah membuang molekul yang tidak terikat, mRNA hibridisasi dipulihkan dan ditranslasi dalam kloning tanpa sel. Ini memberikan sampel murni dari protein yang dikodekan oleh cDNA.
Translasi hybrid-arrest sedikit berbeda karena cDNA yang terdenaturasi ditambahkan langsung ke sampel mRNA (Gambar 135). Hibridisasi kembali terjadi antara cDNA dan pasangan mRNA-nya, tetapi dalam kasus ini mRNA yang tidak terikat tidak dibuang. Sebaliknya seluruh sampel ditranslasi dalam cloning tanpa sel. mRNA hibridisasi tidak dapat melakukan translasi langsung, sehingga semua protein kecuali yang dikode oleh gen kloning disintesis. Oleh karena itu, produk translasi gen diidentifikasi sebagai protein yang tidak ada dalam autoradiograf.
206