Page 240 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

DNA genom untai tunggal dan beberapa siklus amplifikasi DNA dilakukan dalam mesin PCR. Analisis produk PCR dalam gel agarosa akan menunjukkan jika tanaman benar-benar berubah ketika fragmen DNA yang ukurannya setara dengan gen yang disisipkan ada dan diamplifikasi.
Analisis Southern blot menentukan integritas gen yang dimasukkan: apakah gen tersebut lengkap dan tidak terfragmentasi, pada orientasi yang benar, dan dengan satu nomor salinan. Urutan pengkodean DNA adalah probe yang mengikat DNA genom untai tunggal dari tanaman transgenik yang ditransfer pada kertas nitroselulosa. Autoradiografi akan mengungkapkan status transgenik tanaman. Satu salinan transgen diinginkan untuk ekspresi optimal.
Analisis Northern blot menentukan apakah transkrip atau RNA pembawa pesan (mRNA) dari DNA yang diperkenalkan ada dan ditranskripsikan dengan benar di tanaman transgenik. Messenger RNA dari tanaman transgenik diisolasi dan diproses untuk berikatan dengan membran nitroselulosa. DNA berlabel digunakan untuk mengikat mRNA dan dapat divisualisasikan melalui autoradiografi.
Analisis Western blot atau protein immuno blotting adalah teknik analisis yang digunakan untuk mendeteksi apakah tanaman transgenik menghasilkan produk protein spesifik dari gen yang diinginkan. Sampel protein diekstraksi dari tanaman transgenik, diproses menjadi protein terdenaturasi dan dipindahkan ke membran nitroselulosa. Protein kemudian diperiksa atau dideteksi menggunakan antibodi spesifik terhadap protein target.
Langkah 6. Backcross Breeding (jika diperlukan)
Transformasi genetik biasanya dilakukan pada varietas elit atau komersial
yang sudah memiliki sifat agronomis yang diinginkan tetapi tidak memiliki sifat penting dari transgen. Dengan demikian, setelah berhasil dilakukan, tanaman rekayasa genetika akan mudah direkomendasikan untuk komersialisasi jika menunjukkan stabilitas dalam beberapa generasi dan setelah berhasil melewati dan memenuhi persyaratan pendaftaran varietas. Beberapa transformasi tanaman
233