Page 21 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 21
a. DNA sisipan
Tahap awal yang dilakukan pada pembuatan koleksi genom yaitu mengisolasi dan memurnikan DNA kromosom S. typhimurium. Proses selanjutnya DNA kromosom dipotong secara parsial dengan menggunakan enzim restriksi Sau3AI, sehingga menghasilkan fragmen-fragmen DNA yang dapat di klon dalam vektor yang sesuai. Jika koleksi genom mengandung fragmen DNA yang dihasilkan dari pemotongan parsial maka fragmen akan tumpang tindih dan koleksi akan memberikan tidak hanya satu struktur gen, tetapi juga gen-gen lainnya. Pada proses ini yang harus diperhatikan adalah untuk memperoleh ukuran fragmen DNA random yang sesuai dan cocok dengan vektor. Bila hal ini tidak dipertimbangkan, maka proses kloning akan mengalarni kesulitan. (Winnacker, 1987).
Jumlah urutan nukleotida sisi pengenal enzim restriksi tertentu pada molekul DNA dapat dihitung
21
