Page 13 - e-MODUL PROJECT BASED LEARNING KIMIA BAHAN ALAM

4) Pemisahan dan pemurnian fraksi
Tahap terakhir dari proses isolasi metabolit sekunder adalah

pemisahan lanjut dan pemurnian dari fraksi-fraksi yang telah diperoleh.

Pemisahan dan pemurnian ini menggunakan metode kromatografi

kolom gravitasi (KKG). Bahan yang disiapkan sama seperti KCV, yaitu

silika KKG dan silika impreg dengan perbandingan yang sama seperti

KCV. Jika massa sampel kurang dari 20 mg, maka tidak perlu

menggunakan silika impregnasi. Eluen yang digunakan saat elusi tidak

ada takaran khusus, yang penting melebihi tinggi silika. Tinggi silika

pada kolom yang baik adalah 15−20 mg. Sebelum melakukan KKG,

dicari eluen dengan perbandingan yang tepat menggunakan KLT

terlebih dahulu. Pada profil KLT, fraksi yang ingin dipisah harus memiliki

Rf kurang dari 0,3 dan spot semakin terpisah ketika dilakukan elusi

hingga minimal 3 kali. agar dapat terpisah dengan baik pada KKG. Eluen

yang digunakan dimulai dari perbandingan yang telah dicari, kemudian

jika noda telah terpisah jauh dan noda atas tidak turun-turun, eluen

bisa diganti dengan yang lebih polar dan seterusnya, hingga dicuci

dengan pelarut metanol (paling polar). Di bawah ini ditampilkan profil

KLT pencarian eluen dan packing kolom pada KKG.

n-heksana : etil asetat = 8 : 2 (v/v)

Kromatogram KLT pencarian eluen

12