Page 150 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

yang dikhususkan pada sisi restriksi di mana fragmen DNA asli telah disisipkan. Plasmid adalah vektor kloning pertama, mudah diisolasi dan dimurnikan, dan dapat di transformasi kembali kedalam sel inangnya. Plasmid sering mengandung gen resistensi antibiotik, yang digunakan untuk memilih sel inangnya. Salah satu plasmid yang paling banyak digunakan adalah pBR322. Plasmid ini mengandung gen resisten untuk kedua antibiotik, ampisilin dan tetrasiklin dan banyak sisi restriksi yang hanya ada sekali dalam plasmid dan terletak di dalam gen resistensi antibiotik. Susunan ini membantu dalam pendeteksian plasmid rekombinan setelah melakukan transformasi. Misalnya, jika DNA asing dimasukkan ke dalam gen resisten ampisilin, plasmid tidak dapat memberikan resistensi untuk ampisilin setelah penyisipan ini. Dengan demikian, transforman yang kehilangan resistensi terhadap ampisilin mengandung plasmid rekombinan.
Seperti diketahui, DNA plasmid biasanya tidak mengkode fungsi penting apa pun, dan plasmid dapat membelah secara normal. Plasmid biasanya ada dalam bentuk multikopi, dan mereka dapat menjadi sarana untuk mengamplifikasi jumlah gen salinan tunggal esensial yang dimasukkan ke dalam genom mereka. Misalnya, penyisipan pada plasmid dapat menyebabkan amplifikasi cepat gen yang diperlukan untuk mencapai tingkat resistensi yang tinggi terhadap antibiotik. Dengan kata lain adalah bahwa setiap gen yang dibawa plasmid dapat dicopy dalam jumlah besar, sehingga memungkinkan sejumlah besar produk protein dapat dibuat.
Sebagian besar vektor plasmid adalah multicopy, dan salah satu vektor plasmid adalah pBR322, yang merupakan salah satu vektor plasmid yang paling dikenal karena membawa dua gen resistensi antibiotik, ampR dan tetA yang bertindak sebagai penanda untuk memilih dan mengkarakterisasi rekombinan pada plasmid ini. Plasmid ini mengandung banyak sisi enzim restriksi yang tersedia untuk menyisipkan fragmen DNA. Sebagai contoh, ketika fragmen Pst I dimasukkan ke sisi restriksi PstI pada vektor pBR322, yang terletak di dalam gen ampR, penyisipan semacam itu biasanya tidak akan pernah menghancurkan fungsi gen yang sesuai. Akibatnya, 𝛽𝛽 laktamase aktif tidak pernah disintesis lebih lanjut. Oleh karena itu, plasmid rekombinan dapat dideteksi dengan kemampuannya memberikan resistensi terhadap
143