Page 165 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

salinan identik, tidak hanya dari dirinya sendiri tetapi juga dari gen yang dibawanya. Ketika sel inang membelah, salinan molekul DNA rekombinan diteruskan keketurunan dan replikasi vektor lebih lanjut terjadi. Setelah sel inang melakukan pembelahan sel, koloni, atau klon yang diproduksi, maka setiap sel dalam klon berisi satu atau lebih salinan molekul DNA rekombinan, gen yang dibawa oleh molekul rekombinan sekarang dikatakan telah dikloning.
4. Enzim restriksi endonuklease, dan enzim ligase. Enzim restriksi endonuklease adalah enzim yang diperlukan untuk memotong untai DNA yang di inginkan, sedangkan enzim ligase digunakan untuk meligasi DNA sehingga memperoleh DNA rekombinan.
Proses rekayasa genetika perlu menyiapkan setidaknya tiga jenis DNA yang berbeda. Pertama, DNA sel total akan sering dibutuhkan sebagai sumber bahan untuk memperoleh gen yang akan dikloning. DNA sel total dapat berupa DNA dari kultur bakteri, dari tumbuhan, dari sel hewan, atau dari jenis organisme lain. Jenis DNA kedua yang akan dibutuhkan adalah DNA plasmid murni. Persiapan DNA plasmid dari kultur bakteri mengikuti langkah-langkah dasar yang sama seperti pemurnian DNA sel total, dengan perbedaan penting bahwa pada tahap tertentu DNA plasmid harus dipisahkan dari sebagian besar DNA kromosom yang juga ada di dalam sel. Ketiga adalah DNA Vektor, seperti DNA faga akan dibutuhkan jika vektor kloning faga akan digunakan. DNA faga umumnya dibuat dari partikel bakteriofaga dari sel yang terinfeksi, sehingga tidak ada masalah dengan kontaminasi DNA bakteri. Namun, diperlukan teknik khusus untuk menghilangkan kapsid faga. Pengecualian adalah bentuk replikasi untai ganda dari M13, yang dibuat dari sel E. coli dengan cara yang sama seperti plasmid bakteri.
B. LANGKAH-LANGKAH DALAM KLONING GEN
1) Persiapan DNA sel total
Langkah pertama dalam proses cloning gen adalah persiapan DNA yang diinginkan atau fragmen DNA target. Persiapan DNA target dilakukan dengan mempertimbangkan jenis prosedur pemurnian DNA yang paling sederhana, di
158