Page 209 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

terikat, bagian dari prosedur ini adalah uji retardasi ge. Pita yang terdiri dari DNA tidak terikat dimurnikan dari gel dan diperlakukan dengan piperidin, bahan kimia yang memotong molekul DNA pada nukleotida termetilasi. Produk piperidin sekarang dipisahkan dalam gel poliakrilamida dan pita berlabel divisualisasikan. Ukuran pita yang terlihat menunjukkan posisi dalam fragmen DNA guanin yang metilasinya mencegah pengikatan protein. Guanin ini terletak dalam urutan kontrol. Uji modifikasi sekarang dapat diulang dengan bahan kimia yang menargetkan nukleotida A, T, atau C untuk menentukan posisi yang tepat dari urutan kontrol.
2) Mengidentifikasi urutan kontrol dengan analisis penghapusan
Retardasi gel, jejak kaki, dan uji interferensi modifikasi dapat menentukan urutan kontrol yang mungkin di hulu gen, tetapi mereka tidak memberikan informasi tentang fungsi dari urutan individu. Analisis penghapusan adalah pendekatan yang sama sekali berbeda yang tidak hanya dapat menemukan urutan control, tetapi yang penting juga dapat menunjukkan fungsi dari setiap urutan. Tekniknya tergantung pada asumsi bahwa penghapusan urutan control akan menghasilkan perubahan cara ekspresi gen kloning (Gambar 131). Misalnya, penghapusan urutan yang menekan ekspresi gen harus menghasilkan gen yang diekspresikan pada tingkat yang lebih tinggi. Demikian pula, jaringan spesifik urutan kontrol dapat diidentifikasi sebagai hasil penghapusannya pada gen target yang diekspresikan dalam jaringan.
Gambar 131 Prinsip analisis Delisi
202