Page 32 - BUKU REFERENSI KLONING GEN

2’deoksinukleosida (dNTP), sedangkan basa yang dipergunakan untuk proses terminasi adalah nukleosida trifosfat (ddNTP). Gugus hidroksil pada gula ribosa ddNTP direduksi pada ujung 2’ dan ujung 3’. Hal ini menyebabkan DNA polimerase tidak dapat membentuk ikatan fosfodiester dengan dNTP atau ddNTP berikutnya, sehingga reaksi polimerisasi berhenti. Penentuan urutan nukleotida pada penelitian ini menggunakan sekuensing KIT .ABI Prisma. Sekuensing kit mengandung dua bagian yaitu: 1) Amplifikasi DNA melalui proses PCR, 2) dan Siklus Taq sekuensing, siklus ini menggunakan Taq Dyedeory terminator sekuensing kit. Selanjutnya DNA dimurnikan lalu dielektroforesis pada alat sekuensing otomatis Aplied Biosystems DNA 373 Sequencer .
32