Page 34 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 34
a. Persiapan DNA templat
Pada penelitian ini DNA templat yang digunakan untuk proses PCR berasal dari bakteri S. typhimurium, S. typhi, dan E. coli. Persiapan larutan DNA templat dilakukan dengan dua cara yaitu:
(1) Larutan DNA templat S. typhimurium dilakukan dengan cara isolasi DNA kromosom dengan mengggunakan KIT Promega, yang akan dijelaskan pada subbab berikutnya.
(2) Larutan DNA templat S. typhi dan E. coli dilakukan dengan cara lisis sel.
Tahap awal yang dilakukan pada proses lisis sel adalah menumbuhkan masing-masing koloni tunggal balcteri S. typhi dan E. coli dalam 50 mL media Luria-Bertani (LB) cair yang berisi bacto tryptone 1 %, yeast ekstract 0,5% , dan NaCl I% (Sambrook et al., 1989). Kemudian diinkubasi pada suhu 37°C dengan kecepatan 200 rpm selama satu malam. Selanjutnya diambil 1 mL biakan tersebut dan dimasukkan kedalam tabung Eppendorf Lisis
34
