Page 35 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 35
dilakukan dengan menambahkan 1 00 μL bufer lisis 10x yang mengandung Tris-HCI 50 mM pH 8,5, EDTA 1 mM pH 8,5, Tween 20 0,5%, dan proteinase-K 0,2 mg/mL (Noer et al., 1994). Campuran reaksi selanjutnya diinkubasi pada suhu 50°C selama l jam, setelah itu dipanaskan pada suhu 95°C selama 3 menit, dan disentrifugasi. Supematannya selanjutnya digunakan sebagai templat PCR.
b. Amplifikasi DNA templat
Proses selanjutnya adalah mempersiapkan campuran komponen-komponen yang diperlukan dalam rekasi PCR. Untuk mempermudah proses ini campuran tersebut dibuat di dalam satu tabung sebagai master mix. Untuk satu kali reaksi PCR master mix yang harus dibuat adalah sebagai berikut ke dalam tabung Eppendorf 1,5 mL dimasukkan 31,75 μL ddH20, 5 μL bufer PCR 10 x pH 8,3 (Tris- HCI 10 mM, MgCl2 1,5 mM, dan KCl 59 mM), 1 μL dNTP yang terdiri atas dGTP, dATP, dTTP, dan dCTP
35
