Page 37 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 37
untuk memisahkan dan menentukan ukuran fragmen-fragmen DNA (Sambrook et al., 1989). Untuk pengecekan DNA hasil PCR digunakan gel agarosa 2%. Gel agarosa 2% dibuat dengan melarutkan 0,8 gram bubuk agarosa ke dalam 40 mL TAE 1x (Tris-HCI 40 mM, EDTA 10 mM pH 8,0) (Sambrook et al., 1989). Campuran ini dipanaskan sampai mendidih, kemudian didinginkan sampai suhu 60°C, larutan agarosa selanjutnya dituangkan pada cetakan yang telah berisi sisir, didiarnkan sampai memadat. Pengecekan hasil PCR dilakukan dengan cara mencampurkan 10 𝜇𝜇L DNA hasil PCR dengan 2 uL loading buffer (sukrosa 50%, EDTA 0,1 M, dan bromfonol biru 0,1%, pH 8,0) Campuran tersebut dimasukkan ke dalam sumur gel yang telah dibuat dalam cetakan alat mini subTMDNA elektroforesis cell (Bio-Rad) yang telah berisi larutan TAE 1x. Kemudian alat ini dihubungkan dengan arus listrik pada tegangan 70 volt selama 1 jam. Hasil elektroforesis selanjutnya direndam alam larutan etidium bromida 0,5ug/mL Penampakan hasil
37
