Page 38 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 38
elektroforesis dilakukan dengan bantuan sinar UV, standar ukuran DNA yang digunakan adalah pUC19 yang dipotong dengan enzim Hinf I.
2. lsolasi DNA Kromosom
lsolasi DNA kromosom adalah tahap penting yang harus dilakukan, karena DNA kromosom merupakan sumber gen untuk keperluan kloning. Adapun tahap-tahapnya adalah sebagai berikut: Kultur biakan yang telah dikocok semalam dengan kecepatan 200 rpm pada suhu 37oC diambil 1 rnL dan dirnasukkan ke dalam Eppendorf. Kemudian disentrifugasi 14000 rpm dengan jari-jari rotor 7 cm selama 1 menit, supematan dibuang, dan ditanmbahkan 600 μL larutan Nuclei lysis (untuk selanjutnya dipergunakan alat sentrifugasi dengan jari-jari rotor 7 cm). Proses selanjutnya dihornogenkan dengan pipet sampai sel teruspensi lalu diinkubasi pada suhu 80 °C selama 5 menit untuk melisis sel, kemudian dinginkan pada suhu karnar.
38
