Page 39 - BUKU REFERENSI KLONING GEN

Setelah itu ditambahkan 3 μL larutan RNase ke lisat sel, tabung eppendorj dibolak-balik sebanyak 25 kali. Campuran diinkubasi pada suhu 37 °C selama 15 menit, kemudian didinginkan pada suhu kamar. Proses selanjutnya ditambahkan 200 μL larutan Protein precipitation, selanjutnya dilakukan vortex terhadap campuran dengan kecepatan tinggi selama 20 detik, kernudian didiamkan dalam es selama 5 menit. Setelah itu disentrifugasi 14000 rpm selama 3 menit Supernatan dipindahkan ke Eppendorf steril, kemudian ditambahkan 600 μL isopropanol. Campuran diinversi sampai seperti membentuk benang-benang strand DNA, lalu disentrifugasi 14000 rpm selama 2 menit. Supematan dibuang dan ditambahkan 600 μL etanol 70% kemudian campuran dibolak-balik beberapa kali, lalu disentrifugasi 14000 rpm selama 2 menit, lalu etanolnya dibuang dan keringkan pelet DNA pada suhu kamar. Pelet DNA dilarutkan dengan I 00 μL Larutan DNA rehidration, inkubasi pada 65°C selama 1 jam atau overnight pada suhu kamar, kemudian
39