Page 41 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 41
3. DNA sisipan
Keberhasilan untuk menghasilkan koleksi genom yang representatif, memerlukan ukuran molekul DNA sisipan yang sesuai dengan molekul DNA vektor (Winnacker, 1987). DNA sisipan dapat dipersiapkan dengan cara pemotongan parsial menggunakan enzim restriksi Sau3AI. Pemotongan parsial menggunakan enzim restriksi harus dioptimasi dahulu pada skala kecil, selanjutnya dapat dilakukan pemotongan parsial pada skala besar untuk pembuatan koleksi genom. Optimasi pemotongan DNA sisipan skala kecil dilakukan dengan menggunakan variasi konsentrasi enzim Sau 3AI. Proses ini dilakukan dengan prosedur sebagai berikut. Ke dalam masing-masing tabung Eppendorf (diperlukan 6 buah Eppendorf) dimasukkan 2 μL DNA kromosom S. typhimurium (mengandung 1 μg DNA kromosom S. typhi murium). Selanjutnya ke dalam masing-masing Eppendorf ditambahkan 3 μL bufer 10 x Sau3AI (Tris-HCI 10 mM pH 7,5, MgCl2 7 mM
41
