Page 43 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 43
kemudian tambahkan ddH2O, hingga volume akhir 750 μL. Proses selanjutnya sama seperti yang dilakukan pada pemotongan parsial skala kecil (Promega, The Source of Discovery, 1996).
4. Permurnian fragmen DNA
Hasil pemotongan parsial DNA kromosom selanjutnya dielektroforesis pada gel agarosa, sebagai standar ukuran DNA digunakan DNA 𝜆𝜆-yang dipotong dengan enzim Hind III. Fragmen DNA yang berukuran 4-5 kb pada gel agarosa dipotong dan dimurnikan dengan cara sebagai berikut: Gel agarosa yang telah dipotong dimasukkan ke dalam tabung Eppendorf, kemudian ditambahkan 3 kali volume NaI 6 M, lalu diinkubasi pada suhu 55 °C selama 5 menit. Setelah gel mencair ditambahkan 5 μL glass powder untuk 1 μg DNA, bila pemurnian lebih dari 1 μg DNA, maka ditambahkan 2 μL glass powder setiap penambahan 1 μg DNA. Campuran disentrifugasi dengan menggunakan mikrosentrifugasi type 5415 C
43
