Page 45 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 45
5. DNA vektor
Molekul DNA vektor yang digunakan pada penelitian ini adalah plasmid pUC19, yang berukuran 2,69 kb. Vektor ini selanjutnya dipotong dengan enzim restriksi BamHI, hasil pemotongan dengan enzim ini akan komplemen dengan DNA sisipan hasil pemotongan dengan enzim Sau3AI. Hasil pemotongan vektor pUC19 dielektroforesis pada gel agarosa akan menunjukkan satu pita dengan ukuran 2,69 kb. Proses selanjutnya dilakukan defosforilasi terhadap vektor pUC 19 dan uji defosforilasi. Proses defosforilasi dilakukan dengan tujuan untuk menghindari terjadinya ligasi antara dirinya sendiri (self ligation) (Sambrook et al., 1989).
a. Defosforilasi vektor
Proses defosforilasi dilakukan sebagai berikut. Sebanyak 10 μg DNA plasmid pUC 19 sirkular dipotong dengan 20 unit enzim restriksi BamH1 dalam waktu satu jam. Campuran DNA pUC19 hasil
45
