Page 46 - BUKU REFERENSI KLONING GEN

pemotongan diambil kurang lebih 300 ng dan dianalisis dengan cara elektroforesis untuk mengetahui plasmid sudah terpotong sernpuma. Jika plasmid sudah terpotong sempuma dirnurnikan dengan ekstraksi fenol kloroform dan presipitasi dengan etanol. Larutan DNA diarnbil kurang lebih 200 ng disimpan pada suhu -20 °C, kemudian DNA sisa ditambahkan 15 μL bufer CIP 10 x {Tris-HCI 10 mM pH 9, KCI 50 mM, MgCl2 1 mM, ZnCl2 0, 1 mM, dan gliserol 50% pH 8,0). Kemudian ditambahkan enzim CIP 0,2 unit dan diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan 3,75 μL SOS 0,5% dan larutan 1,5 μL EDTA 5mM pH 8,0 kemudian ditambahkan Proteinase-K hingga konsentrasi akhhir 100 ng/μL, campuran diinkubasi pada suhu 56 °C selama 30 menit. Selanjutnya diekstraksi dengan fenol dan kloroform, kemudian dipresipitasi dengan etanol. (Sambrook el al., 1989).
46