Page 48 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 48
ditambahkan 0,5 μL T4 ligase (0,5 unit}, dan ddH20 hingga volume akhir 10 𝜇𝜇L Lalu diinkubasi pada suhu 16 °C selama 16 jam. Ligasi DNA pUC19 dengan DNA sisipan dilakukan sebagai berikut: Sejumlah 2 μL DNA pUC 19 (70 ng) yang didefosforilasi, dicampurkan 1 μL bufer T4 ligase 10 x, 2 μL DNA sisipan (198 ng), 2 μL enzim T4 ligase (lunit) dan ditambahkan ddH20 hingga volume akhir 20 μL. Campuran diinkubasi pada suhu 16 °C selama 16 jam (Amersham Life Science).
C. Transformasi
Pada proses transformasi, langkah awal yang harus dilakukan adalah pembuatan kompeten sel. Langkah ini dilakukan sebagai berikut: E. coli JM 109 ditumbuhkan pada 50 mL media LB cair selama 16- 18 Jam. Sebanyak 1 00 μL biakan tersebut ditumbuhkan kembali pada 10 mL media LB cair sampai mencapai OD 0,2 pada panjang gelombang
48
