Page 50 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 50
dicampurkan dengan 70 ng DNA rekombinan, kemudian didiamkan dalam es selama 40 menit. Setelah proses tersebut segera diinkubasi dalam waterbath pada suhu 42 °C selarna 3 menit (heat Shock). Setelah dilakukan heat shock didiamkan pada suhu ruang selama 10 menit, ditambahkan LB cair sebanyak 1 mL, dan diinkubasi 37 °C selama 45 menit. Seianjutnya transforman ditumbuhkan pada media LB yang mengandung antibiotik ampisilin dan 40 μL IPTG 20 %, dan 40 uL X-gal 20 mg/mL (Sambrook et al., 1989).
6. lsolasi DNA plasmid rekombinan
lsolasi DNA plasmid rekombinan dilakukan dengan menggunakan metode skala kecil yang telah dimodifikasi pada suhu kamar (Yanti et al., 1996). Metode yang dilakukan sebagai berikut: Biakan koloni tunggal plasmid rekornbinan ditumbuhkan pada 50 mL LB cair selama semalam. Kemudian biakan tersebut dimasukkan ke dalam Eppendorf 1,5
50
