Page 52 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 52
penambahan 800 μL etanol pa, kemudian dilakukan vorlex, dan didiamkan 2 menit pada 25 °c. Sesudah itu di sentrifugasi dengan kecepatan I 2000 rpm pada suhu 25 °C selama 5 menit. Supematan dibuang dan pelet DNA diresuspensi dengan 1 mL etanol 70%, pada suhu kamar, lalu dilakukan vortex. Kemudian larutan DNA disentrifugasi dengan kecepatan 12000 rpm, pada suhu 25 °C, selama 3 detik. Pelet DNA dilarutkan dengan 500 μL TE (Tris-HCI 10 mM pH 8,0,dan EDTA 1 mM pH 8,0). Selanjutnya larutan DNA disimpan pada suhu -20 °C.
7. Karakterisasi DNA plasmid rekombinan
Karakterisasi DNA plasmid rekombinan dilakukan dengan cara analisis enzim restriksi. Pada pemotongan dengan satu enzim restriksi digunakan enzim Eco R1 (Amersham life Science). sedangkan pemotongan dengan dua enzim restriksi digunakan enzim KpnI dan enzim Xbal, (Amersham Life Science). Pemotongan dengan Satu enzim dilakukan
52
