Page 53 - BUKU REFERENSI KLONING GEN

sebagai berikut: Ke dalam tabung Eppendorf dimasukkan DNA sampel 10 μL (500 ng), kemudian tambahkan 2 μl bufer EcoR1 (Tris-HCI 100 mM pH 7,5, MgCl2 7 mM, NaCl 50 mM, 2-merkap-toetanol 7 mM, dan BSA 0,001%). Campuran ditambahkan ddH20 hingga volume akhir 20μL. Selanjutnya ditambahkan enzim Eco R1 1 μL (1 unit), campuran diinkubasi pada suhu 37 °C selama 3 jam. Proses pemotongan dengan 2 enzim restriksi dilakukan sebagai berikut : Ke dalam tabung Eppendorf 1,5 mL dimasukkan DNA sampel 10 μL (500 ng), lalu ditambahkan 2 μL bufer T ( Tris-HCI 10 mM pH 7,4, KCI 50 mM, EDTA 0,1 mM, BSA 0,2 mg/mL, dan gliserol 50%). Kemudian ditambahkan ddH20 hingga volume akhir 20 μL, selanjutnya ditambahkan enzim Kpnl 1 μL (1 unit) dan enzim Xbal 2μL (1 unit). Campuran didiinkubasi pada suhu 37 °C, selama 3 jam (Amersham Life science, 1993}.
53