Page 49 - BUKU REFERENSI KLONING GEN
P. 49
600 nm (lihat pada sub bab isolasi DNA kromosom). Biakkan sel yang mempunyai OD 0,2 kemuclian didinginkan di dalam es selama 10 menit. Selanjutnya disentrifugasi dengan mikrosentrifugasi type 5415 C dengan kecepatan 4000 rpm pada suhu 4°C, selama 10 menit. Kemudian pelet sel diresuspensi dengan IO mL CaCL2 0,1 M dingin dan didiamkan dalam es selama 10 menit. Selanjutnya disentrifugasi dengan mikrosentrifugasi type 5415 C dengan kecepatan 4000 rpm pada suhu 4°C, selama 10 menit. Kemudian pelet sel diresuspensi dengan 2 mL CaCl2 0, 1 M dingin. Kompeten sel selanjutnya dibagi-bagi pada tabung Eppendorf steril sebanyak 200 μL (Sambrook el al., 1989).
Proses selanjutnya dilakukan transformasi sel inang E. coli 1M 109 dengan cara memasukkan masing-masing DNA rekombinan (vektor pUC yang telah membawa DNA sisipan), dan kontrol ligasi ke dalam sel inang. Proses transformasi dilakukan sebagai berikut: Sejumlah 200 μL kompeten sel
49
