Page 120 - Castro Fernández Arturo-Portafolio de evidencia Análisis clínicos

(aproximadamente 12 ml de solución de Na2HPO4 a 88 ml de solución de KH2PO4)

hasta que el pH sea 6.0.

2. Solución saturada de cloruro de amonio (NH4Cl): agregue 250 g de NH4Cl a 1000
ml de agua purificada.

3. Ácido tetraetético de etilendiamina disódica (Na2EDTA) 148 mmol / l: disolver 50 g

/ l en tampón fosfato (pH 6.0) preparado en el paso 1.

4. Sustrato: disuelva 2.5 mg de o-toluidina en 10 ml de solución salina al 0.9% (9 g /

l).

5. Peróxido de hidrógeno (H2O2) 30% (v / v): tal como se compró.

6. Solución de trabajo: a 9 ml de sustrato de o-toluidina, agregue 1 ml de NH4Cl
saturado solución, 1 ml de 148 mmol / l de Na2EDTA y 10 l de H2O2 al 30% (v / v) y

mezclar bien.

Esta solución se puede usar hasta 24 horas después de la

Procedimiento

1. Mezcle bien la muestra de semen.

2. Retire una alícuota de semen de 0.1 ml y mezcle con 0.9 ml de solución de trabajo

(Dilución 1 + 9 (1:10)).

3. Agite suavemente la suspensión de esperma durante 10 segundos e incube a
temperatura ambiente durante 20-30 minutos. Alternativamente, agite continuamente

con un tubo de balanceo sistema.

4. Vuelva a mezclar la muestra de semen antes de retirar una alícuota replicada y

mezclar con Solución de trabajo como arriba.

Evaluación del número de células positivas para peroxidasa en las cámaras del
hemocitómetro

1. Después de 20–30 minutos, mezcle nuevamente las suspensiones de esperma y

llene cada lado de un hemocitómetro con una de las preparaciones replicadas.