Page 13 - e-MODUL KIMIA BAHAN ALAM

kolom gravitasi (KKG). Bahan yang disiapkan sama seperti KCV, yaitu

silika KKG dan silika impreg dengan perbandingan yang sama seperti

KCV. Jika massa sampel kurang dari 20 mg, maka tidak perlu

menggunakan silika impregnasi. Eluen yang digunakan saat elusi tidak

ada takaran khusus, yang penting melebihi tinggi silika. Tinggi silika

pada kolom yang baik adalah 15-20 mg. Sebelum melakukan KKG, dicari

eluen dengan perbandingan yang tepat menggunakan KLT terlebih

dahulu. Pada profil KLT, fraksi yang ingin dipisah harus memiliki Rf

kurang dari 0,3 dan spot semakin terpisah ketika dilakukan elusi hingga

minimal 3 kali. agar dapat terpisah dengan baik pada KKG. Eluen yang

digunakan dimulai dari perbandingan yang telah dicari, kemudian jika

noda telah terpisah jauh dan noda atas tidak turun-turun, eluen bisa

diganti dengan yang lebih polar dan seterusnya, hingga dicuci dengan

pelarut metanol (paling polar). Di bawah ini ditampilkan profil KLT

pencarian eluen dan packing kolom pada KKG.

n-heksana : etil asetat = 8
: 2

Kromatogram KLT pencarian eluen

Berikut langkah dalam melakukan pemisahan dengan KKG:

a) Kolom KKG dicuci dengan pelarut dari yang paling polar ke yang

non-polar. Disumbat kolom dengan sedikit kapas.

b) Dilarutkan sampel dengan sesedikit mungkin pelarut, kemudian

dimasukkan silika impregnasi ke dalam ekstrak. Diaduk-aduk agar