Page 29 - Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

resolusi, dan sebaliknya. Namun, efek ini jauh lebih sedikit
dibandingkan dengan partikel yang lebih besar. Tinggi
pelat teoritis, H, dapat dinyatakan sebagai fungsi
kecepatan aliran fase gerak, u (Gambar 11). Kurva H / u
juga disebut kurva van Deemter. Tingkat aliran optimum
u opt bergantung pada sifat analit.

3. Optimasi Kinerja Kolom

Suatu pemisahan menggunakan metoda kromatografi
dioptimalisasi dengan memvariasikan kondisi percobaan
sampai komponen-komponen dalam campuran terpisah
dengan baik dalam waktu analisis yang singkat.

a. Resolusi

Gambar 12. Pemisahan dua analit

Tujuan kromatografi ialah memisahkan komponen cuplikan
dalam waktu yang masuk akal, menjadi pita atau puncak
ketika cuplikan itu bergerak melalui kolom.
Ukuran kinerja kolom dinyatakan dalam besaran “resolusi
kolom” yang menggambarkan derajat keterpisahan dua
buah puncak dari dua senyawa komponen yang mirip, dan
dilambangkan sebagai R.
Daya pisah R antara dua puncak dapat diukur secara
kuantitatif sebagai berikut :

......... (14)

⁄ ⁄

Dimana
t R : waktu retensi komponen

25