Page 49 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
P. 49
Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
hal ini perlu dilakukan juga pemeriksaan spektra UV-
Vis dari puncak analit.
Kemurnian puncak tidak hanya membandingkan
puncak-puncak kromatogram saja karena puncak-
puncak kromatogram dan harga waktu tambat banyak
sekali variasinya dan dipengaruhi oleh beberapa
faktor dalam analisis.
Spektrum HPLC dengan satu panjang gelombang
tidak dapat dipakai untuk menentukan kemurnian
puncak kromatogram. Photodiode Array adalah
detektor yang sangat memadai untuk mengetahui
validitas puncak kromatogram suatu analit.
b) Analisa kuantitatif terhadap dua zat yang memberikan
puncak tidak terpisah.
Detektor UV dengan satu maupun dua panjang
gelombang sama sekali tidak akan mampu
menentukan kadar dua komponen yang puncaknya
tidak terpisah.
Teknik pemisahan dua puncak yang tidak terpisahkan
dapat dilakukan dengan dua macam cara apabila
digunakan detektor Photodiode Array yang dilakukan pada
rentang panjang gelombang 200 – 650 nm.
a) Teknik penghapusan puncak
Dengan teknik ini penentuan kadar dilakukan secara
bergantian terhadap puncak yang tidak terpisah
setelah dilakukan penghapusan puncak secara
bergantian. Penghapusan puncak terhadap satu
puncak dilakukan dengan jalan memakai panjang
gelombang maksimum dan panjang gelombang acuan
(reference).
b) Teknik perbandingan terkontrol
Teknik ini memakai nilai perbandingan dua sinyal
pada dua panjang gelombang. Panjang gelombang
yang dipilih adalah panjang gelombang maksimum
dan panjang gelombang minimum.
43
