Page 45 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Jika detektor spektrofotometri digunakan, pelarut yang
digunakan untuk pembuatan fasa gerak harus transparan
pada panjang gelombang pendeteksian, terutama bila
metode uji menentukan panjang gelombang pengukuran
rendah. Analis harus memastikan bahwa pelarut yang
digunakan memenuhi persyaratan. Penyesuaian pH, jika
perlu, harus dilakukan di komponen berair fase gerak. Jika
penyesuaian dilakukan pada campuran, pH yang dihasilkan
disebut "pH nyata" dan kurang dapat diulang. Buffer
molaritas tinggi harus dihindari dalam persiapan fase gerak.
Jika buffer digunakan, sistem dapat dibilas dengan
campuran air yang memadai dan fase gerak organik untuk
mencegah kristalisasi garam.

7. Penghubung tubing dan fitting
Efisiensi penuh dari kolom analisis mungkin tidak akan
pernah tercapai karena keterbatasan desain pompa, injektor,
dan detektor. Sambungan antara injector/kolom, kolom/
detektor dan/atau detektor/detektor dapat mengganggu
keseluruhan efisiensi sistem. Setiap alat kelengkapan harus
dari tipe "zero dead volume" (ZDV). Disarankan bahwa
panjang minimum tabung kapiler dengan diameter internal
maksimum 0,25 mm digunakan untuk kelengkapan alat ini
untuk meminimalkan perluasan pita.

8. Detektor
Digunakan untuk mendeteksi sampel. Detektor yang
Spektrofotometer absorpsi
dibutuhkan adalah yang memiliki sensitivitas tinggi, linear
ultraviolet (UV/vis) biasanya
untuk jangka konsentrasi tertentu, dan dapat mendekati
digunakan dalam analisis
eluen tanpa mempengaruhi resolusi kromatografi.
farmasi. Dalam kasus spesifik
Detektor pada HPLC dikelompokkan dalam 2 golongan,
spektrofotometer
yaitu:
fluoresensi, refraktometer
1) Berdasarkan pengukuran diferensial suatu sifat yang
diferensial (RI), detektor
dimiliki baik oleh molekul sampel maupun fase gerak (bulk
elektrokimia, detektor
property detector)
hamburan cahaya evaporasi
Detektor ini dapat dibedakan menjadi:
(ELSD), detektor aerosol
a) Detektor Indeks Bias
bermuatan (CAD),
Detektor indeks bias merupakan detektor yang juga
spektrometer massa (MS)
luas penggunaannya setelah detektor ultraviolet.
atau detektor khusus lainnya
Dasarnya ialah pengukuran perbedaan indeks bias
dapat digunakan.

39