Page 40 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
P. 40
Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Gambar 18. Kolom HPLC
Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok yaitu:
a. Kolom analitik
Kolom analitik digunakan untuk penentuan jenis dan
jumlah analit yang diperiksa. Ditinjau dari ukurannya
(panjang dan diameternya) kolom HPLC dibagi menjadi
beberapa bagian, yaitu:
Tabel 1. Macam-macam kolom HPLC
Jenis kolom Panjang (cm) Diameter (mm) Dp(um)
Konvensional 10-20 4,5 10
Microbore 10 2,4 5
High speed 6 4,6 3
Tujuan kolom dibuat dengan Kolom mikrobor/High Speed mempunyai 3 keuntungan
diameter internal sangat yang utama dibanding dengan kolom konvensional, yaitu:
kecil (kolom mikro) adalah: 1) Jumlah fase gerak yang dibutuhkan pada pemisahan
1. Kepekaan menjadi lebih menggunakan kolom mikrobor hanya 80% atau lebih
teliti, 2. Mencegah difusi
kecil dibanding dengan kolom konvensional karena
fase gerak, 3. Memperluas
pada kolom mikrobor kecepatan alir fase gerak lebih
kemampuan detektor, 4.
kecil (10 -100 μl/menit).
Sampel yang dianalisis
2) Aliran fase gerak yang lebih kecil membuat kolom
sedikit
mikrobor lebih ideal jika digabung dengan
Sedangkan tujuan kolom spektrometer massa.
dibuat pendek (high speed) 3) Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solut
adalah: 1. Menghasilkan lebih pekat, karenanya jenis kolom ini sangat
resolusi yang baik 2. bermanfaat jika jumlah sampel terbatas misal sampel
Memperkecil harga diameter klinis.
rata-rata partikel fasa diam Meskipun demikian, dalam prakteknya, kolom
3. Waktu retensi (tR) mikrobor ini tidak setahan kolom konvensional dan kurang
menjadi singkat bermanfaat untuk analisis rutin. Kolom mikro / high speed
dengan dp = 5 dan dp = 3 harus diperhatikan lebih teliti
34
