Page 117 - BUKU AJAR BIOKIMIA 1 K5FN

1. Elektroforesis Kertas.
Metode yang paling sederhana untuk memisahkan asam amino adalah elektroforesis kertas. Setetes larutan dari campuran asam amino ditempatkan pada selembar kertas filter yang sudah dibasahi oleh buffer pada pH tertentu. Medan listrik dengan tegangan tinggi diberikan pada kertas tersebut. Karena perbedaan nilai pK’, asam amino akan bermigrasi menuju arah yang berbeda dan pada kecepatan yang berbeda di sepanjang kertas, tergantung pada pH sistem buffer dan tegangan listrik yang dipergunakan.
Contoh: Pada pH 1,0: Asam amino histidin, arginin dan lisin mempunyai muatan +2 dan bergerak lebih cepat menuju katoda bermuatan negatif dibandingkan dengan asam amino lainnya, yang mempunyai muatan +1. Pada pH 6,0 sebaliknya, asam amino bemuatan positif (lisin, arginin, histidin) bergerak menuju katoda, dan asam amino yang bermuatan negatif (asam aspartat dan asam glutamat) menuju anoda. Semua asam amino lain akan tinggal pada, atau dekat titik asal, karena senyawa ini tidak mempunyai gugus mengion selain dari gugus αamino dan α-karboksil dan mempunyai titik isoelektrik yang hampir sama ditentukan dari nilai pK’1 dan pK’2.
Selembar kertas filter
amino
+
Anoda
Katoda
Anion Kation
Ruangan buffer
T1 T2
Gambar 67 Elektroforesis Kertas
114
Spot mengandung campuran asam