Page 170 - BUKU AJAR BIOKIMIA 1 K5FN
P. 170
Pada teknik ini ligan spesifik bagi protein yang akan diisolasi terikat secara kovalen dengan butiran polimer tidak larut, berukuran 10 sampai 50μm.
Untuk mengisolasi protein ini dari ekstrak sel, contoh ekstrak ditempatkan pada suatu kolom yang tersusun atas butiran polimer yang sudah berikatan dengan ligan, dan kolom ini dicuci berulang-ulang dengan buffer. Satu-satunya protein yang bertahan pada kolom adalah protein yang mempunyai afinitas tinggi dengan ligan yang terikat pada butiran; sisa priotein lainnya akan tercuci. Karena afinitas dan spesifisitas protein dengan ligan amat tinggi, seringkali seseorang dapat megisolasi dan memurnikan jumlah yang amat kecil dari suatu protein spesifik dari ekstrak sel yang mengandung ratusan jeis protein lain dalam satu tahap.
Bagaimanakah seseorang dapat memperoleh protein yag terikat tadi dari kolom afinitas dalam bentuk murni? Jelaskanlah dasar prosedur yang anda kemukakan.
8. Kromatografi pertukaran ion merupakan metoda paling banyak yang di pergunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan menghitung jumlah tiap-tiap asam amino di dalam suatu campuran. Metode ini juga memanfaatkan perbedaan dalam tingkah laku asam-basa dari asam amino, tetapi terdapat factor tambahan yang menyebabkan prosedur ini efektif. Jelaskan mekanisme pemisahan protein melalui metode ini.
167
