Page 59 - Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

kecil dapat mempengaruhi konsentrasinya
 Menutup labu dan membolak-balikkan labu agar bahan tercampur
dan terlarut dengan merata.

3. Pembuatan deret larutan standar Vitamin C
- Pipet larutan induk masing-masing 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, dan 5 ml,
encerkan dengan fase gerak dalam labu ukur 10 ml.
- Homogenkan larutan, kemudian saringlah semua larutan standar
tersebut dengan menggunakan membran PTFE
- Tempatkan hasil saringan ke dalam vial bertutup yang telah diberi
label
- Lakukan degassing selama 5 menit. Larutan standar siap
diinjeksikan.

4. Persiapan sampel
- Menyediakan beberapa tablet vitamin C berbeda, menggerus halus
masing-masing tablet tersebut
- Melarutkan 300 mg vitamin C dalam air dan diencerkan sampai 100,0
mL air.
- Mengambil alikuot 10 mL larutan di atas dan diencerkan sampai
100,0 mL dengan air
- Larutan sampel disaring dengan Millipore dan ditampung dalam botol
vial 2 ml, kemudian di degassing selama + 5 menit.

5. Persiapan instrumen HPLC
- Sementara melakukan preparasi sampel dan standar, hidupkan
peralatan sesuai SOP.
- Kondisikan instrumen HPLC dengan :
 Fase gerak dengan sistem elusi isokratik air 55%, metanol 45%
 Kolom : C-18 (12,5 cm)
 Panjang gelombang : 254 nm
 Laju alir : 0,75 mL/menit
 Volume injeksi : 20 µL
 Pastikan kabel penghubung listrik telah tersambung dengan benar
 Tekan tombol ON pada saklar listrik
 Isi botol fase gerak dengan volume yang memadai dan kosongkan
botol penampung
 Tekan tombol ON pada alat, berturut-turut untuk power, detektor,
dan pompa
 Lakukan pemrograman alat dengan komputer. Ikuti langkahnya
sesuai instruksi dalam komputer
 Pilihlah mode yang akan digunakan sesuai dengan parameter
kondisi instrumen

55