Page 174 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

Molekul yang tidak terikat jarang menyebabkan masalah karena, meskipun mereka dapat diambil oleh sel bakteri, hanya dalam keadaan luar biasa mereka akan direplikasi. Lebih jauh mungkin bahwa enzim di dalam bakteri inang mendegradasi potongan-potongan DNA ini. Molekul vektor self- ligated dan plasmid rekombinan yang salah lebih penting karena mereka direplikasi sama efisiennya dengan molekul yang diinginkan. Namun, pemurnian molekul yang diinginkan masih dapat dicapai melalui kloning karena bagi satu sel tidak biasa untuk mengambil lebih dari satu molekul DNA. Setiap sel memunculkan satu koloni, sehingga setiap klon yang dihasilkan terdiri dari sel-sel yang semuanya mengandung molekul yang sama. Tentu saja, koloni yang berbeda mengandung molekul yang berbeda: beberapa mengandung molekul DNA rekombinan yang diinginkan, beberapa memiliki molekul semut rekombinan yang berbeda, dan beberapa mengandung vektor self-ligated. Oleh karena itu, masalahnya bagaimana untuk mengidentifikasi koloni yang mengandung plasmid rekombinan yang benar.
Sebagian besar spesies bakteri mampu mengambil molekul DNA dari media tempat mereka tumbuh. Seringkali molekul DNA yang diambil dengan cara ini akan terdegradasi, tetapi kadang-kadang mampu bertahan dan bereplikasi di sel inang. Khususnya ini terjadi jika molekul DNA plasmid dengan asal replikasi yang dikenali oleh inang. Di alam, transformasi mungkin bukan proses utama dimana bakteri memperoleh informasi genetik. Hal ini dicerminkan oleh fakta bahwa di laboratorium hanya beberapa spesies (terutama anggota genus Bacillus dan Streptococcus) yang dapat diubah dengan mudah. Studi tentang ini ini telah mengungkapkan bahwa mereka memiliki mekanisme canggih untuk pengikatan dan penyerapan DNA. Sebagian besar spesies bakteri, termasuk E. coli, hanya mengambil DNA dalam jumlah terbatas dalam keadaan normal. Untuk mengubah spesies ini secara efisien, bakteri harus menjalani beberapa bentuk perlakuan fisik dan/atau kimia yang meningkatkan kemampuannya untuk mengambil DNA.
167