Page 175 - BUKU AJAR ASAM NUKLEAT

Seperti banyak terobosan dalam teknologi DNA rekombinan, perkembangan menyangkut transformasi terjadi pada awal 1970-an, ketika diamati bahwa sel-sel E. coli yang telah direndam dalam larutan garam sedingin es lebih efisien pada serapan DNA daripada sel yang tidak direndam. Sebuah larutan 50 mM kalsium klorida (CaCl2) secara tradisional digunakan, meskipun garam lain, terutama rubidium klorida, juga efektif. Persisnya mengapa perlakuan ini berhasil, belum dipahami. Mungkin CaCl2 menyebabkan DNA mengendap di bagian luar sel, atau mungkin garam bertanggung jawab atas beberapa hal jenis perubahan pada dinding sel yang meningkatkan pengikatan DNA. Bagaimanapun, perendaman CaCl2 hanya mempengaruhi pengikatan DNA, dan bukan penyerapan sebenarnya ke dalam sel. Ketika DNA ditambahkan ke sel perlakuan, DNA tetap melekat pada bagian luar sel, dan pada tahap ini tidak diangkut ke dalam sitoplasma. Pergerakan DNA yang sebenarnya ke dalam sel yang kompeten dirangsang dengan menaikkan suhu secara singkat hingga 42°C. Sekali lagi, alasan pasti mengapa kejutan panas ini efektif belum dipahami.
Gambar 106 Tansformasi (Sumber Brown, 2010)
Transformasi sel yang kompeten adalah prosedur yang tidak efisien, betapapun hati-hatinya sel telah disiapkan. Meskipun 1 ng vektor plasmid yang disebut pUC8 dapat menghasilkan 1000-10.000 transforman, ini mewakili penyerapan hanya 0,01% dari semua molekul yang tersedia. Lebih jauh lagi, 10.000 transforman hanyalah sebagian kecil dari jumlah total sel yang ada dalam kultur yang kompeten. Fakta terakhir ini berarti bahwa beberapa cara harus ditemukan untuk
168