Page 161 - BUKU AJAR BIOKIMIA 1 K5FN
P. 161
Untuk mengidentifikasi residu terminal karboksil, polipeptida diinkubasi dengan enzim karboksipeptidase yang menghidrolisis ikatan peptida pada ujung terminal karboksil. Sedangkan untuk mengidentifikasi residu terminal amino Sanger menggunakan pereaksi 1fluoro-2,4-dinitrobenzena yang dapat mencirikan residu terminal-amino dari rantai polipeptida sebagai turunan 2,4- dinitrofenil (DNP) berwarna kuning.
Tahap III : Pemotongan Rantai Polipeptida.
Untuk memisahkan fragmen-fragmen peptida umumnya digunakan metode hidrolisis enzimatik dengan enzim tripsin. Enzim ini hanya mengkatalisa hidrolisis ikatan peptida dengan gugus karboksil yang ada pada residu lisin atau arginin tanpa memandang panjang deret asam amino. Suatu polipeptida dengan 5 lisin dan atau arginin biasanya akan menghasilkan enam peptida yang lebih kecil. Semua peptida (kecuali satu) akan mengandung residu lisin atau arginin pada posisi terminal karboksil. Fragmen yang dihasilkan kemudian dipisahkan dengan khromatografi pertukaran ion pada kolom tertentu sehingga menghasilkan map peptida.
158
