Page 24 - Хэнтий аймгийн боом өвчний голомтын судалгаа

Хэнтий аймгийн боом өвчний голомтын судалгаа

ын 10хбуфер, Taq полимераза фермент, MgCl2, 100 хос нуклеотидын

шатлалтай стандарт жишигч (size marker ) тус тус ашиглав.

Праймер хамгаалах эсрэгтөрөгчийн рХО1 плазмид, 596 х.н.с
Праймерийн дараалал:

Шууд праймер : РА5 5 TCC TAA CAC TAA CGA AGT CG 3
Урвуу праймер: РА8 5 GAG GTA GAA GGA TAT ACG GT 3

Праймер бүрээсний рХО2 плазмид 846 х.н.с
Шууд праймер: F BA: 1234 (5 CTG AGC CAT TAA TCG ATA TG 3)

Урвуу праймер: R BA: 1301 (5 TCC CAC TTA CGT AAT CTG AG 3)

ДНХ-ийг ялгах арга: B.anthracis-ийн ДНХ-ийг ялган авах нь урвалийн эцсийн үр

дүнд нөлөөлөх гол хүчин зүйл юм. Энэ зорилгоор гарган авсан 3 өсгөврөөс
B.anthracis-ийн ДНХ-ийг ялган цэвэршүүлэхэд буцалгах арга болон “Quagene”

компаний худалдааны цомог хэрэглэн ДНХ ялгав.

Буцалгах аргаар ДНХ ялгах: 18 цаг өсгөвөрлөсөн колониос нянгийн урхиар

о
нэг дүүрэн авч 100 мл ариун нэрмэл усанд хийж цийдмэгжүүлэн цийдмийг 100
С-ийн усан ваннанд 3-4 минут буцалгаж хөргөөд 1200 эрг мин 15 минут

эргүүлэв. Дээд шингэнийг авч ПГУ –д ДНХ болгон ашиглав.

“QIAGENE” цомгоор ДНХ ялгах: Өсгөврөөс ДНХ ялгаж цэвэршүүлэхэд

цомогт ирсэн зааврын дагуу хийж гүйцэтгэв. Дээжнээс 1.5 мл-ийг эпиндорфийн
тубенд хийж 7500 эргэлтээр 5 мин эргүүлнэ. Шингэн хэсгийг соруулж асгаад

тундсан дээр 180 мкл АТL буфер болон протеиназ К нэмж тундсыг уустал
0
вортексоор холино. 56 С-ийн усан ваннд 1 цаг байлгана. 200мл AL буфер нэмж
о
15 секунд холиод 70 С-ийн усан ваннд 10 минут байлгана. 200 мл 96%-ийн
этанол нэмж 10 секунд хольсоны дараа бүх шингэнийг соруулан авч
зориулалтын ДНХ ялгах тубенд хийнэ. 8000 эрг минут хурдаар 1 минут

эргүүлнэ. Шингэнийг асгаж 500 мкл AW-1 буферээр нэмж 8000 эргэлтээр 1
минут эргүүлнэ. Шингэнийг асгаж AW-2 буферээс 500 мл-ийг нэмж 14000

хурдаар 3 минут эргүүлнэ. Шингэнийг асгаж шүүлтүүртэй колонкыг ариун тубенд

шилжүүлж 100 мл АЕ буфер хийн өрөөний температурт 5 минут байлгасны
0
дараа 800 хурдад 1 минут эргүүлэв. -20 С хэмд хадгалав.

Очирбатын Хурцбаатар 20