Page 21 - Fascicolo Brevetto GTI

Dott. Agronomo ed Enologo Buiani Aldo
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I singoli componenti della pellicola di Abeego analizzati durante questo progetto sono stati prelevati dal lotto utilizzato per realizzare il prodotto finale.
Fase di test
Nella fase di sperimentazione del test value i cerchi in carta da filtro Whatman TM (12,7 mm) sono stati utilizzati come supporti per l'olio e la cera. Frammenti di pellicola e tessuto di Abeego sono stati ritagliati per avere la stessa forma e dimensione dei cerchi di carta. Carta e pellicola sono stati sterilizzati nell'autoclave. L'olio è stato preparato lasciandolo in acqua bollente per 1 ora. Le resine sono state sterilizzate con etanolo al 70%. I cerchi di carta sterile sono stati immersi in olio o
cera fusa. Per scopi di standardizzazione sono stati selezionati pezzi di resine in modo che il loro peso fosse entro il 10% l'uno dall'altro.
Per gli esperimenti di attività antibatterica sono stati utilizzati ceppi batterici di Bacillus cereus, Escherichia coli W3110, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis e Staphylococcus aureus. Per il controllo positivo sono stati utilizzati dischi imbevuti di kanamicina (25 μg / ml o 50 μg / ml). Due ceppi di Saccharomyces cerevisiae - CRY1 e MYA3666 (VL6-48) - sono stati usati come rappresentanti dei lieviti. Il batterio M13 (Messing, 1993) e P1vir (Luria et al. 1960) sono stati utilizzati per i test virali. Il fago M13 è stato amplificato infettando il ceppo di E. coli JM109, mentre il P1vir è stato amplificato infettando E. coli DH10B. La crescita del brodo batterico è stata eseguita nel terreno Luria-Bertani (LB) (Bertani, 1951). La crescita
del brodo di lievito è stata effettuata nel mezzo di estratto di lievito-peptone-destrosio (YPED) integrato con adenina (YPAD) (Murthy et al. 1975). Per i terreni solidi è stato aggiunto l'agar alla concentrazione dell'1,5%.
I ceppi sono stati coltivati durante la notte in LB e campioni non diluiti sono stati distribuiti su piastre LB utilizzando tamponi di cotone sterili. Dischi di pellicola Abeego, tessuto, olio, resina e cera d'api sono stati preparati e posti sterilmente sulle piastre con le colture di cui sopra. Il tessuto Abeego è stato utilizzato come controllo negativo (poiché non contiene cera d'api) e come controllo positivo sono stati utilizzati dischi imbevuti di kanamicina. Le piastre sono state incubate a 37 ° C per
18-20 ore fino a quando è stato osservato il prato di crescita batterica. Le zone di inibizione sono state analizzate misurando il loro raggio, cioè la distanza dal centro
della zona al suo confine. Per il dosaggio di S. enteritidis i dischi Abeego sono stati lasciati in 1 ml di terreno LB in una piastra per microtitolazione per 18 ore. Quindi