Page 31 - BAN TIN KH&CN AN GIANG SỐ 01.2022

KHOA HỌC, CÔNG NGHỆ VÀ ĐỔI MỚI SÁNG TẠO

khoang, mùn thóc, đất ở các khu vực đồng Chỉ tiêu theo dõi: hình thái khuẩn lạc (KL),
ruộng (Hình 1). Đối với mẫu xác côn trùng sau hình thái tế bào (TB), tỷ lệ sâu chết hay độ hữu

khi thu thập thì được rửa nhẹ nhàng trong nước hiệu diệt sâu sau 1, 3, 5, 7 ngày; Độ hữu hiệu
cất vô trùng để loại bỏ bụi và vi khuẩn bám (Abbort, 1925).
dính bề mặt. Sau khi thu thập các mẫu phân
lập, các mẫu xác sâu khoang, đất, mùn thóc
được nghiền rồi trộn với 10 ml môi trường T3 Trong đó: C: phần trăm sâu còn sống ở nghiệm
lỏng chứa 0,25 M đệm natri acetate (pH = 6,8) thức đối chứng.
và lắc trong 4 giờ ở 150 vòng/phút, nhiệt độ

30 C. Mẫu được xử lý nhiệt ở 80 C trong 3 T: phần trăm sâu còn sống ở nghiệm thức xử
0
0
phút. Tiến hành lấy 0,2 ml dịch nổi trải trên lý bằng dịch vi khuẩn.
đĩa petri có môi trường T3 nuôi ở 30 C trong 3 Các dòng vi khuẩn tiềm năng được tiến
0
ngày. Chọn các khuẩn lạc đơn lẻ và làm thuần hành phân tích trình tự gene vùng 16S rRNA
bằng cách cấy ria trên môi trường T3. và so sánh kết quả giải trình tự trên ngân hàng

gene.
2.2.2 Thử nghiệm sản xuất sinh khối vi

khuẩn trên môi trường lỏng
Chủng vi khuẩn có hoạt tính diệt sâu cao

nhất (MT3) được hoạt hóa trên môi trường
T3. Sau đó, tiến hành nuôi cấy nhân sinh khối
cấp một ở môi trường trên môi trường Luria
Bertani (LB), pH:7,5 trong 96 giờ ở nhiệt độ

phòng 200 rpm và đếm mật số khuẩn lạc. Khi
Hình 1. Mẫu thí nghiệm thu thập.
Nuôi cấy các chủng trên môi trường H de mật số 108 tế bào/mL, bổ sung 4% (v/v) trên
Barjac ở 30 C, lắc 220 vòng/phút trong 40 giờ. mỗi nghiệm thức.
0
Sau đó, tiến hành xác định số lượng bào tử, và Nghiệm thức NT1: Luria Bertani (LB),
khi bào tử đạt số lượng bào tử 109 bào tử trở muối (0.002 g/l FeSO , 0.02 g/l ZnSO , 0.02
4 4
lên thì tiếp tục tiến hành thử hoạt tính diệt sâu. g/l MnSO , 0.3 g/l MgSO ), pH:7,5.
4 4
Thử hoạt tính diệt sâu khoang theo Nguyễn Nghiệm thức NT2: Luria Bertani (LB),
Thiện Phú và Trần Thạnh Thủy (2013). Thí muối (0.002 g/l FeSO , 0.02 g/l ZnSO , 0.02
4
4
nghiệm thử hoạt tính diệt sâu khoang sẽ được g/l MnSO , 0.3 g/l MgSO ) và 2g/l glucose,
bố trí trong hộp nhựa, sâu khoang sẽ được pH:7,5. 4 4
cho ăn bằng lá cải đã được nhúng dịch lên
men vi khuẩn được pha loãng đạt đến nồng độ Nghiệm thức NT3: Luria Bertani (LB),

107 khuẩn lạc/mL. Nước cất để làm mẫu đối muối (0.002 g/l FeSO , 0.02 g/l ZnSO , 0.02
4
4
chứng. Sau 1, 3, 5 và 7 ngày sau khi cho ăn lần g/l MnSO , 0.3 g/l MgSO ) và 2g/l rỉ đường,
4
4
đầu ghi nhận tỷ lệ tử vong. pH:7,5.
BẢN TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ AN GIANG SỐ 01/2022 31