Page 35 - Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Pompa ada 2 jenis yaitu pompa volume konstan dan pompa
tekanan konstan. Pompa terbuat dari bahan yang inert
terhadap semua pelarut. Bahan yang umum digunakan
adalah gelas baja antikarat dan teflon. Aliran pelarut dari
pompa harus tanpa denyut untuk menghindari hasil yang
menyimpang pada detektor.

Sistem Elusi HPLC
Sistem pompa HPLC sudah
Terdapat dua sistem elusi pada HPLC, yaitu :
diprogram untuk dapat
1) Sistim elusi isokratik
melakukan elusi dengan satu
Elusi isokratik didefinisikan sebagai suatu sistem elusi
macam pelarut atau lebih.
dimana kekuatan fase gerak dibuat tetap dari awal sampai
akhir analisis. Kata ini diciptakan oleh Csaba Horvath
yang merupakan salah satu pelopor HPLC.
Pada sistim ini elusi dilakukan dengan satu macam pelarut
pengembang atau lebih dari satu macam pelarut
pengembang dengan perbandingan yang tetap. Misalnya
metanol : air = 50% ; 50% v/v.
2) Sistim elusi gradien
Elusi gradient didefinisikan sebagai penambahan
kekuatan fase gerak selama analisis kromatografi
berlangsung. Sistem elusi gradient dapat mempersingkat
waktu retensi dari senyawa-senyawa yang tertahan kuat
dalam kolom. Pada sistim ini elusi dilakukan dengan
pelarut pengembang campur yang perbandingannya
berubah dalam waktu tertentu. Misalnya metanol : air =
40% : 60% v/v dengan kenaikan kadar metanol 8% setiap
menit. Gradien dapat dihentikan sejenak atau dilanjutkan.

Gambar 16. Pompa isokratik dan gradien

31