Page 36 - Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Keuntungan elusi gradient adalah sebagai berikut:
o Mempersingkat total waktu analisis
o Meningkatkan resolusi persatuan waktu tiap senyawa
o Memberikan peak yang tajam (ramping)
o Meningkatkan sensitivitas

3. Injektor

Saat sampel diinjeksikan ke dalam kolom, diharapkan agar
pelarut tidak mengganggu masuknya keseluruhan sampel ke
dalam kolom. Injeksi dapat menggunakan syringe.
Larutan sampel biasanya dimasukkan ke dalam fase gerak
yang mengalir pada atau di dekat kepala kolom
menggunakan sistem injeksi berdasarkan desain katup
injeksi yang dapat beroperasi pada tekanan tinggi. Sistem
injeksi semacam itu memiliki fixed-loop atau perangkat
volume variabel yang dapat dioperasikan secara manual
atau oleh auto-sampler. Pengisian sebagian loop dapat
menyebabkan presisi volume injeksi lebih rendah.
Cuplikan harus dimasukkan kedalam pangkal kolom (kepala
kolom),
diusahakan agas sesedikit mungkin terjadi gangguan pada
kemasan kolom.
Ada tiga jenis dasar injektor, yaitu:
a. Hentikan aliran/stop flow: aliran dihentikan, injeksi
dilakukan pada kinerja atmosfir, sistem tertutup, dan
aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa digunakan karena
difusi di dalam aliran kecil dan resolusi tidak dipengaruhi.
b. Septum: injektor-injektor langsung ke aliran fase gerak
umumnya sama dengan yang digunakan pada
kromatografi gas. Injektor ini dapat digunakan pada
kinerja sampai 60-70 atmosfir. Tetapi septum ini tidak
tahan dengan semua pelarut-pelarut kromatografi cair.
Disamping itu, partikel kecil dari septum yang terkoyak
(akibat jarum injektor) dapat menyebabkan
penyumbatan.
c. Katup putaran (loop valve): ditunjukkan secara skematik
dalam Gambar 2, tipe injektor ini umumnya digunakan
untuk menginjeksi volume lebih besar daripada 10 µl dan
sekarang digunakan dengan cara otomatis (dengan
adaptor khusus, volume-volume lebih kecil dapat

32