Page 15 - 猪病防治

实训四 猪瘟的实验室检测

【实训内容】
1.猪瘟荧光抗体检测。
2.猪瘟病毒荧光 RT-PCR 检测
3.猪瘟病毒单抗酶联免疫吸附试验。
4.免疫胶体金技术检测抗原和抗体。

5.猪瘟正向间接血凝试验。
【实训材料】
1.猪瘟荧光抗体检测

器材 荧光显微镜、冰冻切片机、煮沸消毒锅、染色缸、滤纸等。
试剂 0.01M pH7.2 PBS、伊文思蓝溶液、丙酮、蒸馏水、缓冲甘油、猪瘟荧光抗体、
猪瘟兔化弱毒苗等。
病料 疑似猪瘟病料。
2.猪瘟病毒荧光 RT-PCR 检测

器材 荧光 PCR 检测仪及配套反应管、小型台式高速离心机、混匀器、冰箱、微量
移液器（5 µL、10 µL、100 µL、1 000 µL）及配套吸头、1.5 mL 离心管（无核酸酶）。

试剂 病毒 RNA 柱式提取试剂盒（Buffer A、Buffer B、Buffer C、RNase-Free 吸
附柱和收集管）、猪瘟病毒荧光 RT-PCR 检测试剂盒（荧光 RT-PCR 反应液、酶混合物、DEPC
水、阳性对照、阴性对照）。
病料 疑似猪瘟病料。

3.猪瘟单抗 ELISA 检测

猪瘟单抗纯化抗原、兔抗猪 IgG 酶标抗体、猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清、 ELISA
反应板、酶联免疫检测仪等。试剂见附录 1。
4.免疫胶体金技术检测抗原和抗体

猪瘟病毒抗原检测卡 、 猪瘟病毒抗体检测卡、吸管、塑料试管、待检血清、待检病
料等。
5.猪瘟正向血凝试验
V 型医用血凝板、10~100ul 猪瘟间接血凝抗原（猪瘟正向血凝诊断液）、 阳性对照血
清、阴性对照血清、稀释液、待检血清等。

【方法步骤】
1.猪瘟荧光抗体检测

（1）扁桃体冰冻切片和组织压片的制备。采取活体或新鲜尸体的扁桃体，按常规方
法用冰冻切片机制成 4µm 切片，吹干后在预冷的纯丙酮中于 4℃固定 15min，取出风干。
制作压片时，取一小块扁桃体、淋巴结、脾或其他组织，用滤纸吸去表面液体，然后取一
块干净载玻片，稍为烘热，将组织小块的切面触压玻片，作成压印片，置室温内干燥。
（2）染色。用 1/40 000 伊文思蓝溶液将荧光抗体作 8 倍稀释，将稀释的荧光抗体滴

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