Page 16 - 猪病防治
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加到标本片上，于 37℃温箱内感作 30~40min。再用 0.01M pH 7.2 PBS 充分漂洗，分别于
2min、5min、8min 更换 PBS，最后用蒸馏水漂洗 2 次，吹干后滴加缓冲甘油数滴，加盖
玻片封片，用荧光显微镜检查。
（3）镜检。在腺窝（隐窝）上皮细胞内可见到明显的猪瘟病毒感染的特异性荧光。
在 100 倍放大观察时能清楚地看到腺窝的横断面，上皮细胞部分呈现新鲜的黄绿色，腺腔
呈红色，其他组织呈淡棕色或黑绿色。高倍放大观察时细胞核呈黑色圆形或椭圆形，细胞
质呈明亮的黄绿色。
（4）注意事项。注意废弃物的处理，防止散毒。
2.猪瘟病毒荧光 RT-PCR 检测
（1）核酸提取（用病毒 RNA 柱式提取试剂盒）
①待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用 n 表示，取 n 个灭菌的 1.5 mL 离心
管，逐管编号。
② 每管加入 Buffer A 500µL。
③每管分别加入已处理的待检样品、阳性对照、阴性对照各 200 µL，充分混匀，室温
放置 10 分钟。
④取与上述离心管等量的 RNase-Free 吸附柱，编号。将离心管中的溶液和絮状沉淀转
移至 Rnase-Free 吸附柱，每个吸附柱要分别套上收集管（为避免堵塞吸附柱，尽量不
要吸悬浮杂质）。
⑤ 12000 转室温离心 30 秒。弃去收集管液体，将吸附柱放回收集管中。
⑥吸附柱内加入 600uL Buffer B 12000 转离心 30 秒。弃去收集管液体，将吸附柱放回
收集管中。
⑦重复步骤⑥。
⑧12000 转空柱离心 2 分钟，去除残留液。
⑨将每个吸附柱分别移入新的 1.5mL 离心管中，向柱中央加入 50 µL Buffer C，室温
静置 1 分钟，12000 转离心 30 秒，离心管中液体即为模板 RNA。获得的 RNA 溶液，冰上
保存备用（注意提取的 RNA 须在 2 h 内进行 RT-PCR 扩增，若需长期保存须放置-70 ℃
冰箱，但应避免反复冻融）。
（2）荧光 RT-PCR 扩增（用荧光 RT-PCR 检测试剂盒）
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