Page 18 - 猪病防治

检测结束后，应立即对工作台进行清洁。

3.猪瘟单抗酶联免疫吸附试验（ELISA）
检测猪瘟抗体的 ELISA 方法对于开展流行病学调查具有重要的作用
（1）用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做 100
倍稀释，每孔包被 100µl，4℃湿盒过夜。
（2）甩去孔内液体，用洗涤液冲洗酶联板 3 次，每次 3~5min，拍干。

（3）用 PBS 将待检血清做 400 倍稀释，每孔加 100µl。同时将猪瘟阳性血清、阴性
血清各做 100 倍稀释，对照孔中各加 100µl，置 37℃1.5h~2h。
（4）重复（2）。

（5）用 PBS 将兔抗猪 IgG 酶标抗体做 100 倍稀释，每孔加 100µl，置 37℃1.5h~2h。
（6）重复（2）。
（7）每孔加入底物溶液 100µl，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立即
终止反应，并以阴性孔做空白对照。
（8）每孔加入终止液 50µl，用酶联免疫吸附检测仪测定 490nm 波长的光密度（OD）。

（9）结果判定
在猪瘟弱毒酶联板上：OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒抗体
阴性。

在猪瘟强毒酶联板上：OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒抗体
阴性。
4.免疫胶体金技术检测猪瘟抗原和抗体
（1）免疫胶体金技术检测抗原
① 将猪瘟病毒抗原检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并作好标记。

② 在检测卡的加样孔内加入 2 滴（70~100µl）待检血清/血浆/全血样品或鼻拭子稀释
液。20 分钟内观察并记录试验结果。
③结果判定

阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测线区（T）出现紫红色线，对照线区（C）未出现
紫红色线。
（2）免疫胶体金技术检测抗体

①将猪瘟病毒抗体检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并作好标记。
②在检测卡的加样孔内加入 2 滴（70~100µl）待检血清/血浆/全血样品。20 分钟内观
察并记录试验结果。

③结果判定
阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测线区（T）出现紫红色线，对照线区（C）未出现

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