Page 22 - 猪病防治

实训五 猪繁殖与呼吸障碍综合征的实验室检测

【实训内容】
1.应用繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR 诊断试剂盒进行检测和流行病学调查。
2.酶联免疫吸附试验。
【实训材料】
1.RT-PCR

繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR 诊断试剂盒、PCR 仪、研钵、试管、离心机、离心管、
EP 管、漩涡振荡器、超净工作台、天平、微波炉、电泳仪、紫外成像仪、琼脂糖、Hanks
液等。

2.酶联免疫吸附试验
繁殖与呼吸障碍综合症诊断试剂盒(美国 IDEXX 公司生产的 Herd-chekTM PRRS 酶
联免疫检测试剂盒)、待检血清（免疫猪或耐过猪的血清)。
【方法步骤】
1.反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

用 PCR 方法可以检测出组织均质物、血清、精液、口腔拭子和肺部冲洗液中的病毒
核酸，RT-PCR 分析方法是用逆转录酶将病毒的 RNA 逆转录为 DNA，然后再对 DNA 进
行指数倍扩增至可检测的水平。该方法的敏感性和特异性比较高，检测周期短，仅在 1~3h

内即可得出结果。PCR 产物可用于测序，从而扩展了该方法的诊断应用价值。
应用繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR 诊断试剂盒进行检测，应按说明书进行操作。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）
按试剂盒的说明书进行操作，简述如下：

将待检样品 (血清) 40 倍稀释，取 100μl 分别加入酶标板 PRRS 孔和 NHC 孔，室
温培养 30min。用洗涤液洗涤 3~5 次，甩尽孔内液体，并在滤纸上拍干。每孔加入 PRRS
酶标抗体 100μl，室温作用 30 min， 用洗涤液洗涤 3~5 次， 甩尽孔内液体，并拍干。每

孔加入 100μl 底物 ( TMP) 溶液，室温作用 15 min， 然后每孔加入 100μl 终止液。混匀，
于酶标仪上 630nm 处读数，利用 XCHKIS 软件系统处理数据。
结果判定：其中 PRRS 孔，阴性对照的 OD630≤0.15，阳性对照的 OD630≥0.15，且细
胞孔的阴性和阳性对照的 OD630≤0.12，符合检测的条件，S/P＝（OD 样品病毒孔－OD
样品细胞孔）/（OD 阳性对照病毒孔－OD 阳性对照细胞孔），结果判定如下：S/P＜0.4
判为阴性（－）；S/P≥0.4 判为阳性（＋）。

【实训报告】
根据训练结果，写出一份酶联免疫吸附试验报告。

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