Page 23 - 猪病防治

实训六 伪狂犬病的检测

【实训内容】
1. 直接免疫荧光试验检测猪伪狂犬病病毒。
2.乳胶凝集试验检测猪群抗体（用于强弱毒感染鉴别及免疫效果评价）。
3.动物接种试验。
【实训材料】

1.直接免疫荧光试验材料
碳酸盐缓冲甘油、磷酸盐缓冲液、丙酮（分析纯）、伪狂犬病荧光抗体、冰冻切片机、
荧光显微镜、溶液配制见附录。

2.乳胶凝集试验材料
伪狂犬病毒 gG 蛋白致敏乳胶抗原、伪狂犬病毒 gE 蛋白致敏乳胶抗原、伪狂犬病毒
致敏乳胶抗原、伪狂犬病毒阳性血清和注射 gG 基因缺失疫苗血清、玻片、吸头等。
3.动物接种试验材料

研钵、生理盐水、青霉素、链霉素、冰箱、离心机、离心管、试管、烧杯、注射器、
饲养笼、消毒液（百毒杀）等。
【方法步骤】
（一）直接免疫荧光试验

1.样品采集 扑杀可疑动物，取脑、淋巴结、扁桃体迅速送检实验室，如不能及时送
出，必须冻结保存，避免腐败、自溶。本法也可用于对疑似伪狂犬病病毒的培养物进行鉴
定。
2.切片制备 将样品组织块切成 1cm×1cm 的面，不经任何固定处理，直接贴于冰冻切
片托上，进行切片，切片厚度要求 5~7µm，将切片展贴于 0.8mm×1mm 厚的洁净载玻片上。

3.固定 将切片置纯丙酮中固定 15min，取出立即放入 0.01mol/L，pH7.2 的磷酸盐缓
冲液中，轻轻漂洗 3~4 次，取出，自然干燥后尽快进行荧光抗体染色。
4.染色 将伪狂犬病荧光抗体滴加于切片表面，置温盒内于 37 作用 30 分钟，取出
℃
后放入磷酸盐缓冲液中充分漂洗，再用 0.5moL/L，pH9.0~9.5 碳酸盐缓冲甘油封固盖片
（0.1mm 厚），染色后应尽快镜检，必要时可放置低温待检。
5.观察 将染色后的切片标本置激发光为蓝紫光或紫外光的荧光显微镜下观察。
6.判定 荧光显微镜视野中，细胞中出现明亮的黄绿色荧光，判为伪狂犬病病毒感染
阳性。

（二）乳胶凝集试验
1.猪伪狂犬病 gG 鉴别诊断乳胶凝集试验

伪狂犬病 gG 鉴别诊断乳胶凝集试验是用伪狂犬病毒 gG 基因的基因工程表达产物致
敏乳胶抗原以检测动物血清、全血或乳汁中抗 gG 蛋白的抗体。用于伪狂犬病毒感染猪与
gG 基因缺失疫苗免疫猪的免疫学鉴别诊断。
（1）对照试验。检测之前应做对照试验，出现如下结果试验方可成立，否则应重试，
若重试仍不出现如下结果则停止使用：伪狂犬病毒阳性血清与 gG 蛋白致敏乳胶抗原呈阳

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