Page 100 - 猪场生产管理手册

凝集试验可根据抗原性质、反应方式分为直接凝集试验（简称凝集试验）、间接
凝集试验等。下面，以 O 型口蹄疫正向间接血凝试验为例，简要介绍凝集试验。

①原理：抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原-抗体复合物，但
这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。若将口蹄疫抗原吸附（致敏）在经过特殊
处理的红细胞表面，只需少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性，这种经
过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇并结合，出现清晰可见的红细胞
凝集现象。

②适用范围：主要用于检测 O 型口蹄疫免疫动物血清抗体效价。
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③结果判定：猪的 O 型抗体正向间接血凝试验的抗体效价≥2 判为合格。在对
照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该
份血清的抗体效价。例如 1 号待检血清 1~5 孔呈现“++至+++”凝集，6~7 孔呈现“++”
凝集，第 8 孔呈现“+”凝集，第 9 孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体
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效价为 2 （1∶128），免疫合格。
（2）酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA 是当前应用最广、发展最快的一项新技术。其基本过程是将抗原（或抗
体）吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶反应，底物显色后用酶标仪判定结果。
当天即可得到检测结果。下面介绍两种常用的酶联免疫吸附试验（ELISA）。

①猪口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验

a.原理：采用口蹄疫病毒 VP1 合成肽固相化抗原包被于微孔板的微孔表面上。
在相应的反应孔中加入稀释的对照和待检血清，经孵育后，若样品中含有口蹄疫病
毒特异性抗体，则将与多肽抗原结合而吸附于反应孔表面，经洗涤除去未结合抗体
和样品其他组分后，再加入辣根过氧化物酶标记的基因重组蛋白 A/G，同已结合在
反应孔内的样品中的口蹄疫病毒抗原抗体复合物发生特异性结合，再经洗涤除去未
结合的酶结合物，在各孔中加入 TMB 底物工作液，将产生酶分解 TMB 的蓝色产物，
其颜色的深浅与待检样品中口蹄疫病毒特异性抗体含量成正比，加入硫酸溶液终止
反应后，用酶标仪 450nm 波长测定各反应孔中的 OD 值。

b.适用范围：用于检测猪口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体。与猪口蹄疫病毒非结
构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及
疫苗免疫动物。

c.判定：阴性对照孔平均 OD 值应≤0.20，每个阳性对照孔 OD 值应≥0.5，且≤
2.0。否则，试验无效。临界值=0.23×阳性对照孔平均 OD 值；被检样品孔 OD 值<
临界值时，判为阴性，即为抗口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体阴性；被检样品孔 OD
值≥临界值，判为阳性；对判定结果为阳性的样品，应用 2 个孔进行重复检测，重
复检测后若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体阳性；若两
孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体阴性。根据农业部规定，VP1 结
构蛋白抗体 ELISA 的抗体效价≥25 判为免疫合格。

当猪口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与猪口蹄疫病
毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终
判定。
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