Page 101 - 猪场生产管理手册
P. 101
VP1 试剂盒检测结果
+ -
NS 试剂盒检测结果
+ 感染动物 感染动物
- 疫苗接种动物 正常动物
②猪瘟病毒抗体阻断 ELISA 试验(以 IDEXX 公司试剂盒为例)
a.猪瘟病毒抗体 ELISA 检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的
检测试剂盒。该试剂盒是用猪瘟病毒抗原包被的微量反应板,利用阻断 ELISA 原理
来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体。如果被检样品中存在猪瘟病毒抗体,它们就
会阻断辣根过氧化物酶标记(HRPO)的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。单克隆抗体与猪
瘟病毒抗原的结合可以通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判定,即用酶标
仪测定该反应体系的吸光度。当被检样品中含有猪瘟病毒抗体(阳性结果)时,显
色就会变浅,当被检样品中不含有抗猪瘟病毒抗体(阴性结果)时,显色就会变深。
样本的阻断率可以通过样本吸光度与阴性对照吸光度的比值来确定。一个 ELISA 反
应板可以检测 92 份样品(另加两个对照,每个双孔),或 46 个未知样品,每个样品
加双孔。双孔检测法有利于检测结果的准确性。
b.适用范围:用于检测猪瘟病毒免疫抗体。
c.结果判定:被检样本的阻断率大于或等于 40%,该样本就可以被判为阳性(有
CSFV 抗体存在)。被检样本的阻断率小于或等于 30%,该样本就可以被判为阴性(无
抗 CSFV 抗体存在),被检样品的阻断率在 30%~40%之间,应在数日后再对该动物
进行重测。
(3)血清学检测注意要点
①血清学评价标准
免疫效果的血清学评价通常以某种传染病发生时保护性抗体的最低值(临界值)
作为依据,经常应用的评价指标是抗体的转化率和抗体的平均滴度。抗体转化率是
衡量疫苗接种效果的重要指标之一,是指被接种动物免疫接种后抗体转为阳性者所
占的比例。如检查免疫后 14~21d 达到免疫保护临界值的血清样品占总样品的百比率,
5
70%的动物在免疫保护临界值(如口蹄疫 O 型抗体滴度达到 2 )以上,即可认为免
疫合格,可以有效抵御野毒的侵袭。
②免疫监测的频率
养猪场建立某种病的抗体监控程序要充分考虑本场的饲养管理情况和免疫程序
等因素,不同的养殖场应建立适合自己的监控程序,但要注意采用正确的采样方法
和样品数量,同时还要保证一定的频率。一般疫苗免疫后 3~4 周开始检测免疫效果,
以后每隔 4~5 周检测一次。母源抗体的监测,以猪瘟为例,猪瘟母源抗体半衰期大
约 10~14d,一般延续到 2 个月,不同免疫程序、不同的猪群母源抗体消长时间差异
70