Page 103 - 猪场生产管理手册
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作为模板，以和模板正链和负链末端特异性互补的两种寡聚核苷酸作为引物，在 Taq
DNA 聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异性 DNA
片段的基因拷贝数放大 1 倍。经过 30~35 个循环，最终使基因放大数百万倍。将扩
增产物进行电泳，经溴化乙锭等染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见 DNA 片段的扩
增带。对 RNA 病毒检测采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR），RT-PCR 是 PCR 反应
的一种，首先提取病毒 RNA，在反转录酶的作用下，以 RNA 为模板，以引物为起
点合成与 RNA 模板互补的 cDNA 链，随后进行 PCR 反应。
②结果判定。在阳性对照出现目标扩增带、阴性对照无带出现时，试验结果成
立。被检样品出现阳性对照相同位置的扩增带为阳性，否则为阴性。
比如，高致病性猪繁殖与呼吸综合征的检测，针对猪繁殖与呼吸综合征病毒
NSP2 变异区设计引物，对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒进行检测。经过病料处
理、RT-PCR 反应、电泳，紫外灯照射观察，即可得到检测结果。阳性对照出现 400bp
扩增带，阴性对照无对照扩增带时，试验成立，试验样品出现 400bp 扩增带为 PRRSV
（NSP2 1594~1680 变异株）阳性，否则判为阴性。
（三）兽医化验员工作流程及实验室检测计划
1.兽医化验员工作流程
（1）工作程序
①准备试验仪器，配制检测试剂。
②样品检测。兽医化验员接到样品后 4h 内检测，按照兽医操作规程工作。
③填写报告单，由主管签字交经理阅后，送相关部门，并请相关部门签字。
④清理工作台及试验设备和仪器。
⑤填写工作统计表。
（2）工作标准
①根据猪场防疫程序对猪瘟疫苗、猪伪狂犬疫苗、猪呼吸与繁殖综合症等疫苗
的防疫效果进行动态检测，并出具报告，填写猪场疫苗抗体检测统计表。
②根据兽医主管的安排进行相应疾病抗体的检测。
③根据兽医主管的安排，采集病料对病原进行初步的分离与鉴定。
④定期进行饮水卫生检测和饮水余氯的测定。
⑤爱护设备和仪器，药品的保存执行化验室试剂储存规定。
⑥下班及节假日期间水、电及不使用的设备必须关闭。
⑦血液样本 2 日内出结果，水样 4h 内检测（出具结果需要时间与试验方法有关），
药敏试验三日内出结果；填好报告单，由主管签字后，在当日发送到相关部门；报
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